ISO 10993-5 细胞毒性测试
直接接触法使用粘附在培养皿或培养板底部的 L-929 小鼠成纤维细胞。细胞生长至亚汇合（约80%汇合）并将测试物品直接置于细胞上。对于液体和提取物，一张无菌滤纸用测试样品饱和，滤纸直接放在细胞上。将细胞和测试物品一起温育，24小时后在倒置相差显微镜中检查样品。细胞被赋予从0到4的等级，对应于没有反应性到严重反应性。
不建议对密度非常低或非常高的材料进行此测试。非常低密度的材料会漂浮在细胞生长培养基中，当样品放在细胞顶部时，非常高密度的材料可能会损坏细胞。对于低密度和高密度材料，首选琼脂糖覆盖（琼脂糖扩散）方法。
琼脂糖覆盖（琼脂扩散）
琼脂糖覆盖（也称为琼脂扩散）类似于上述直接接触方法，只是它使用琼脂。将琼脂倒在细胞上并使其凝固。然后将测试样品放在琼脂上。琼脂创造了一个“垫子”，保护细胞免受致密物质的影响，同时也防止低密度物质漂浮在生长培养基中。将细胞、琼脂和测试样品孵育超过 24 小时，然后在显微镜下检查，以根据 0-4 分级方案确定对细胞的毒性严重程度。