细胞活力是研究肿瘤学和药剂学的生物化学家常用的技术。细胞活力研究最常见的用途是确定细胞培养中细胞毒性化合物的 IC50。然而，正如你所料，有很多不同的时间你需要知道你的细胞是否还活着。在较大的制药公司中，细胞毒性化合物的 MTT 细胞活力研究作为一种高通量方法进行，因为公司经常筛选大量小分子药物库。为了测量细胞活力，研究人员通常使用 MTT 检测、Cell Titer Blue、台盼蓝排除或 ATP 检测。在本方法指南中，我们将介绍所有这些方法背后的理论，然后以 MTT 检测方案结束。
使用 MTT 测定法测量细胞毒性
通常，要测量细胞活力，您需要用试剂孵育细胞并测量试剂转化为产品的转化率。如果有很多细胞是活的，你的大部分试剂都会被转化。如果大量细胞死亡，那么您的试剂只会部分转化。对于 MTT 测定，使用的试剂是( 3 -( 4 , 5 -二甲基噻唑- 2 -yl)- 2 , 5-二苯基溴化四唑）四唑。这是一种带正电荷的小分子，经过 NADPH 介导的转化为 Formazan。
由于其正电荷，MTT可以轻松进入活细胞和非活细胞。转化后，甲臜产物沉淀在细胞表面附近的细胞内，可以使用分光光度计进行检测。注意：MTT 只需要一个完整且功能正常的线粒体进行转换，因此它是一种代谢测定，而不是增殖测定。我将在未来讨论细胞增殖测定。测定技术非常简单：
1.在微孔板的不同孔中培养相同数量的细胞
2.添加您的细胞毒性化合物并孵育
3.然后更换培养基并加入 MTT，让细胞将 MTT（蓝色）转化为 Formazan（紫色）
4.将 SDS 与 DMF 或 DMSO 一起使用以重新溶解甲臜并杀死细胞（阻止它们再转化任何试剂）
5.然后使用分光光度计测量产生了多少甲臜。
mtt法检测细胞毒性
一些研究人员甚至将 MTT 检测与流式细胞术 (FACS)结合使用，以从非活细胞中分选活细胞。然而，这种情况并不常见，并且有更好的 FACS 染色剂，例如碘化丙啶 (PI)。
细胞效价蓝、台盼蓝和 ATP 检测
如上所述，MTT 测定实际上是一种代谢测定，因为 MTT 分子需要进入细胞并使用 NADPH 转化为甲臜。虽然 MTT 新陈代谢的确切机制尚不清楚，但这意味着线粒体需要完好无损并发挥作用。所以，如果你添加一种会降低线粒体效率的细胞毒性物质，你可能会得到奇怪的结果。在这种情况下，了解其他活/死检测也很有用。研究中使用的其他主要细胞活力测定包括：
细胞滴度蓝：与 MTT 测定类似，该测定涉及将细胞与刃天青（蓝色）一起孵育，并在细胞代谢后形成试卤灵（粉红色）。通常代谢需要 1-4 小时，但它比 MTT 检测灵敏得多，因为您可以通过荧光 (Ex/Em 560 nm/590 nm) 测量产物。这种检测的主要优点是您不需要在 DMF/SDS 中重新溶解产品，因此它更简单。这也是一个很好的高通量检测！